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本制品是在nFect细胞株小RNA转染试剂的基础上加以改进推出的专门用于原代细胞小RNA转染的试剂。nFect^PM可用来转染siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor等200bp以内的小分子RNA，可转染绝大多数原代细胞。

原代细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。nFect^PM能够高效转染绝大多数原代细胞，获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫，nFect^PM也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞，nFect^PM的细胞转染阳性率都在80%以上，而转染细胞死亡率不到10%。nFect^PM的使用也极其简便，先将sRNA与nFect^PM室温混合，再将siRNA-nFect^PM混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

• 原代细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在80%以上，基因敲除效果明显，肝细胞Lamin A/C基因敲除效率在95%以上；
  
• 极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
  
• 转染细胞范围广，绝大多数原代细胞都能获得比较理想的转染结果。

组分	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
nFectPM原代细胞小RNA转染试剂	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
说明书	1份

保存：-20℃，避光，避免反复冻融，有效期1年。


本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

• 细胞接种：
  转染前一天接种细胞，每孔500μL培养基，使细胞在转染时密度在30～50%，尽量不要使用抗生素。
  
• siRNA-nFect^PM混合物准备：
  
  • 12pmol siRNA用50μL无血清培养基稀释。
    
  • 2μL nFect^PM用50μL无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。注意：确保在25min内执行第三步操作，不要过于延迟。
    
  • 孵育5min后，将siRNA稀释液与nFect^PM稀释液混合（总体积100μL）。轻轻混匀，室温孵育20min。
• 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：
  
  • 将100μL混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5mL培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。
    
  • 37℃培养18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

• 转染实验优化：
  为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24孔培养板，siRNA用量在6、12、18、24、30pmol (终浓度10～50nM)之间调整，nFect^PM试剂用量在1.0～3.0μL之间调整。
  
• 转染实验要点：
  
  • 转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；
    
  • 首次实验siRNA的用量设置在终浓度10nM、20nM、30nM、40nM、50 nM进行摸索，后续实验根据实验结果修改。

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